【样本要求(qiu)】

1.样本类型和采集

血(xue)清(qing)：将(jiang)收集于(yu)血(xue)清(qing)分离管的全(quan)血(xue)标(biao)本在室温放置0.5-2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清(qing)即可，或将(jiang)上清(qing)置于(yu)仅供(gong)科研(yan)使用(yong)，不得(de)用(yong)于(yu)临(lin)床诊断。-20℃或-80℃保存，但应避免反复(fu)冻(dong)融(rong)。

血浆(jiang)(jiang)：用(yong)(yong)(yong)EDTA或(huo)(huo)(huo)肝素作为(wei)抗凝剂(ji)采集(ji)标本(ben)，并将(jiang)(jiang)(jiang)标本(ben)在采集(ji)后(hou)的(de)(de)30分钟内于(yu)2-8℃ 1000×g离(li)心(xin)(xin)15分钟，取(qu)上(shang)(shang)清即(ji)可(ke)检测(ce)，或(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上(shang)(shang)清置于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃保存，但应避(bi)免反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)。组(zu)织(zhi)匀(yun)浆(jiang)(jiang)：用(yong)(yong)(yong)预冷的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组(zu)织(zhi)，去(qu)除残留血液（匀(yun)浆(jiang)(jiang)中(zhong)裂(lie)(lie)解的(de)(de)红细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)会影响(xiang)测(ce)量结果），称重后(hou)将(jiang)(jiang)(jiang)剪(jian)碎(sui)(sui)的(de)(de)组(zu)织(zhi)与对(dui)应体(ti)积(ji)的(de)(de)PBS（一(yi)(yi)般按1:9的(de)(de)重量体(ti)积(ji)比，比如1g的(de)(de)组(zu)织(zhi)样品(pin)(pin)对(dui)应9mL的(de)(de)PBS，具体(ti)体(ti)积(ji)可(ke)根据实验(yan)需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)蛋白(bai)(bai)酶抑制剂(ji)）加(jia)(jia)入(ru)(ru)玻(bo)璃(li)匀(yun)浆(jiang)(jiang)器中(zhong)，于(yu)冰上(shang)(shang)充分研磨。为(wei)了进(jin)一(yi)(yi)步裂(lie)(lie)解组(zu)织(zhi)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，可(ke)以对(dui)匀(yun)浆(jiang)(jiang)液进(jin)行超声破(po)碎(sui)(sui)，或(huo)(huo)(huo)反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)。最后(hou)将(jiang)(jiang)(jiang)匀(yun)浆(jiang)(jiang)液于(yu)5000×g离(li)心(xin)(xin)5~10分钟，取(qu)上(shang)(shang)清即(ji)可(ke)检测(ce)，或(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上(shang)(shang)清置于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃保存，但应避(bi)免反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)。细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)裂(lie)(lie)解液: 吸弃培养液，用(yong)(yong)(yong) PBS（0.01 M，pH 7.4）将(jiang)(jiang)(jiang)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)洗一(yi)(yi)遍。用(yong)(yong)(yong)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)刮刮下细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)（不(bu)能用(yong)(yong)(yong)胰酶和 EDTA 处理），加(jia)(jia)入(ru)(ru) 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。悬(xuan)(xuan)浮细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)可(ke)省(sheng)略。收(shou)集(ji)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)悬(xuan)(xuan)液，4℃1000×g 离(li)心(xin)(xin) 10min，弃去(qu)培养基，用(yong)(yong)(yong)预冷的(de)(de) PBS 润洗 3 次(ci)。加(jia)(jia)入(ru)(ru)适量的(de)(de)预冷 PBS 或(huo)(huo)(huo)非变性细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)裂(lie)(lie)解液（临(lin)用(yong)(yong)(yong)前(qian)加(jia)(jia)入(ru)(ru)蛋白(bai)(bai)酶抑制剂(ji)）重悬(xuan)(xuan)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao),通常 6 孔板一(yi)(yi)个(ge)孔的(de)(de)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)量需要 150-250μL PBS 重悬(xuan)(xuan)。 将(jiang)(jiang)(jiang)样品(pin)(pin)放入(ru)(ru)-20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃，使(shi)样品(pin)(pin)冷冻(dong)(dong)，再(zai)放室温解冻(dong)(dong)样品(pin)(pin)，反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong) 3 次(ci)，使(shi)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)充分裂(lie)(lie)解,也可(ke)将(jiang)(jiang)(jiang)样品(pin)(pin)进(jin)行超声破(po)碎(sui)(sui)，以达到裂(lie)(lie)解的(de)(de)目的(de)(de)。4℃ 10000×g 离(li)心(xin)(xin) 10min，除去(qu)细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)碎(sui)(sui)片，取(qu)上(shang)(shang)清即(ji)可(ke)检测(ce)，或(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上(shang)(shang)清置于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃保存，但应避(bi)免反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)。细(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)培养物上(shang)(shang)清或(huo)(huo)(huo)其(qi)它生物标本(ben)：请1000×g离(li)心(xin)(xin)20分钟，取(qu)上(shang)(shang)清即(ji)可(ke)检测(ce)，或(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上(shang)(shang)清置于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃保存，但应避(bi)免反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)。.样本(ben)保存和稳(wen)定性样本(ben)在 2-8℃条件下，可(ke)以储存 72h，在- 20℃或(huo)(huo)(huo)-80℃可(ke)以储存6 个(ge)月(yue)及以上(shang)(shang)。样本(ben)收(shou)集(ji)后(hou)，不(bu)是一(yi)(yi)次(ci)检测(ce)完，请按一(yi)(yi)次(ci)用(yong)(yong)(yong)量分装冻(dong)(dong)存，避(bi)免反复(fu)冻(dong)(dong)融(rong)