【样本要求】

1.样本类型(xing)和采(cai)集

血(xue)清：将收集于(yu)血(xue)清分(fen)离管的全血(xue)标(biao)本(ben)在室(shi)温放(fang)置(zhi)0.5-2小时(shi)或(huo)4℃过夜，然后1000×g离心20 分(fen)钟，取上(shang)清即可，或(huo)将上(shang)清置(zhi)于(yu)仅供科研(yan)使用，不得用于(yu)临床(chuang)诊断(duan)。-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但应避免反(fan)复冻融。

血(xue)浆：用(yong)(yong)(yong)EDTA或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)肝素作为抗(kang)凝(ning)剂(ji)采集(ji)标(biao)本(ben)，并将(jiang)(jiang)标(biao)本(ben)在采集(ji)后(hou)的(de)(de)(de)(de)30分(fen)(fen)(fen)钟内(nei)于(yu)2-8℃ 1000×g离心(xin)15分(fen)(fen)(fen)钟，取上清(qing)(qing)即(ji)可(ke)(ke)检(jian)测(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)(cun)，但(dan)应避(bi)(bi)免(mian)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)。组(zu)(zu)织(zhi)匀(yun)浆：用(yong)(yong)(yong)预(yu)冷(leng)的(de)(de)(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)冲(chong)洗(xi)组(zu)(zu)织(zhi)，去除残留(liu)血(xue)液（匀(yun)浆中裂(lie)解的(de)(de)(de)(de)红细(xi)胞(bao)(bao)会影响(xiang)测(ce)量结果），称重(zhong)后(hou)将(jiang)(jiang)剪碎的(de)(de)(de)(de)组(zu)(zu)织(zhi)与对应体积的(de)(de)(de)(de)PBS（一(yi)(yi)般按1:9的(de)(de)(de)(de)重(zhong)量体积比，比如1g的(de)(de)(de)(de)组(zu)(zu)织(zhi)样(yang)品(pin)对应9mL的(de)(de)(de)(de)PBS，具体体积可(ke)(ke)根据实验需要适当(dang)调整，并做好(hao)记(ji)录。推荐在PBS中加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制剂(ji)）加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)玻璃匀(yun)浆器中，于(yu)冰上充(chong)分(fen)(fen)(fen)研磨(mo)。为了进(jin)一(yi)(yi)步裂(lie)解组(zu)(zu)织(zhi)细(xi)胞(bao)(bao)，可(ke)(ke)以对匀(yun)浆液进(jin)行(xing)超(chao)声(sheng)破碎，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)。最后(hou)将(jiang)(jiang)匀(yun)浆液于(yu)5000×g离心(xin)5~10分(fen)(fen)(fen)钟，取上清(qing)(qing)即(ji)可(ke)(ke)检(jian)测(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)(cun)，但(dan)应避(bi)(bi)免(mian)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)。细(xi)胞(bao)(bao)裂(lie)解液: 吸弃培(pei)(pei)养(yang)液，用(yong)(yong)(yong) PBS（0.01 M，pH 7.4）将(jiang)(jiang)细(xi)胞(bao)(bao)洗(xi)一(yi)(yi)遍。用(yong)(yong)(yong)细(xi)胞(bao)(bao)刮刮下(xia)细(xi)胞(bao)(bao)（不(bu)能(neng)用(yong)(yong)(yong)胰酶(mei)和(he) EDTA 处理(li)），加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru) 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。悬(xuan)浮细(xi)胞(bao)(bao)可(ke)(ke)省略。收(shou)集(ji)细(xi)胞(bao)(bao)悬(xuan)液，4℃1000×g 离心(xin) 10min，弃去培(pei)(pei)养(yang)基，用(yong)(yong)(yong)预(yu)冷(leng)的(de)(de)(de)(de) PBS 润洗(xi) 3 次。加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)适量的(de)(de)(de)(de)预(yu)冷(leng) PBS 或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)非变性细(xi)胞(bao)(bao)裂(lie)解液（临(lin)用(yong)(yong)(yong)前(qian)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制剂(ji)）重(zhong)悬(xuan)细(xi)胞(bao)(bao),通常 6 孔板(ban)一(yi)(yi)个(ge)孔的(de)(de)(de)(de)细(xi)胞(bao)(bao)量需要 150-250μL PBS 重(zhong)悬(xuan)。 将(jiang)(jiang)样(yang)品(pin)放(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃，使(shi)样(yang)品(pin)冷(leng)冻(dong)，再(zai)放(fang)(fang)室温解冻(dong)样(yang)品(pin)，反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong) 3 次，使(shi)细(xi)胞(bao)(bao)充(chong)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)解,也可(ke)(ke)将(jiang)(jiang)样(yang)品(pin)进(jin)行(xing)超(chao)声(sheng)破碎，以达到裂(lie)解的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)。4℃ 10000×g 离心(xin) 10min，除去细(xi)胞(bao)(bao)碎片，取上清(qing)(qing)即(ji)可(ke)(ke)检(jian)测(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)(cun)，但(dan)应避(bi)(bi)免(mian)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)。细(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)养(yang)物上清(qing)(qing)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)其(qi)它生物标(biao)本(ben)：请1000×g离心(xin)20分(fen)(fen)(fen)钟，取上清(qing)(qing)即(ji)可(ke)(ke)检(jian)测(ce)，或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)将(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)置(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)(cun)，但(dan)应避(bi)(bi)免(mian)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)。.样(yang)本(ben)保(bao)存(cun)(cun)和(he)稳定性样(yang)本(ben)在 2-8℃条件下(xia)，可(ke)(ke)以储(chu)存(cun)(cun) 72h，在- 20℃或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)-80℃可(ke)(ke)以储(chu)存(cun)(cun)6 个(ge)月及以上。样(yang)本(ben)收(shou)集(ji)后(hou)，不(bu)是(shi)一(yi)(yi)次检(jian)测(ce)完(wan)，请按一(yi)(yi)次用(yong)(yong)(yong)量分(fen)(fen)(fen)装冻(dong)存(cun)(cun)，避(bi)(bi)免(mian)反(fan)(fan)复(fu)冻(dong)融(rong)(rong)(rong)