【样本要求】

1.样(yang)本(ben)类型和(he)采(cai)集

血(xue)清(qing)：将收集于血(xue)清(qing)分(fen)离管(guan)的全血(xue)标本在室温放(fang)置0.5-2小(xiao)时或(huo)4℃过(guo)夜，然后1000×g离心20 分(fen)钟(zhong)，取上(shang)清(qing)即(ji)可，或(huo)将上(shang)清(qing)置于仅供科研使(shi)用，不得(de)用于临(lin)床诊断(duan)。-20℃或(huo)-80℃保存，但应(ying)避(bi)免反复冻融。

血(xue)浆(jiang)(jiang)(jiang)：用(yong)(yong)EDTA或(huo)(huo)肝素(su)作为(wei)抗凝剂(ji)(ji)采集(ji)标本，并将(jiang)(jiang)(jiang)标本在(zai)(zai)采集(ji)后(hou)(hou)的(de)(de)30分(fen)钟(zhong)(zhong)内(nei)于(yu)2-8℃ 1000×g离(li)心15分(fen)钟(zhong)(zhong)，取上清(qing)(qing)(qing)(qing)即(ji)可(ke)检测，或(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)(qing)(qing)置(zhi)(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)(dan)应(ying)(ying)避免(mian)(mian)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)。组(zu)织(zhi)(zhi)匀浆(jiang)(jiang)(jiang)：用(yong)(yong)预冷(leng)的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组(zu)织(zhi)(zhi)，去除残留血(xue)液(ye)(ye)（匀浆(jiang)(jiang)(jiang)中(zhong)裂(lie)解(jie)(jie)(jie)的(de)(de)红(hong)细(xi)(xi)胞会影响测量(liang)(liang)结(jie)果），称重(zhong)后(hou)(hou)将(jiang)(jiang)(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)(de)组(zu)织(zhi)(zhi)与对应(ying)(ying)体(ti)(ti)(ti)(ti)积的(de)(de)PBS（一(yi)(yi)般按(an)1:9的(de)(de)重(zhong)量(liang)(liang)体(ti)(ti)(ti)(ti)积比(bi)，比(bi)如1g的(de)(de)组(zu)织(zhi)(zhi)样品(pin)(pin)对应(ying)(ying)9mL的(de)(de)PBS，具体(ti)(ti)(ti)(ti)体(ti)(ti)(ti)(ti)积可(ke)根据实(shi)验需(xu)要(yao)(yao)适(shi)当调整，并做(zuo)好记录(lu)。推荐在(zai)(zai)PBS中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)蛋白酶抑制(zhi)剂(ji)(ji)）加入(ru)(ru)(ru)玻(bo)璃匀浆(jiang)(jiang)(jiang)器(qi)中(zhong)，于(yu)冰上充(chong)分(fen)研磨。为(wei)了进一(yi)(yi)步裂(lie)解(jie)(jie)(jie)组(zu)织(zhi)(zhi)细(xi)(xi)胞，可(ke)以(yi)对匀浆(jiang)(jiang)(jiang)液(ye)(ye)进行(xing)超声破碎(sui)，或(huo)(huo)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)。最后(hou)(hou)将(jiang)(jiang)(jiang)匀浆(jiang)(jiang)(jiang)液(ye)(ye)于(yu)5000×g离(li)心5~10分(fen)钟(zhong)(zhong)，取上清(qing)(qing)(qing)(qing)即(ji)可(ke)检测，或(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)(qing)(qing)置(zhi)(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)(dan)应(ying)(ying)避免(mian)(mian)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)。细(xi)(xi)胞裂(lie)解(jie)(jie)(jie)液(ye)(ye): 吸弃培(pei)养液(ye)(ye)，用(yong)(yong) PBS（0.01 M，pH 7.4）将(jiang)(jiang)(jiang)细(xi)(xi)胞洗一(yi)(yi)遍。用(yong)(yong)细(xi)(xi)胞刮刮下(xia)细(xi)(xi)胞（不能用(yong)(yong)胰(yi)酶和 EDTA 处理），加入(ru)(ru)(ru) 2-5mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。悬(xuan)(xuan)浮(fu)细(xi)(xi)胞可(ke)省略(lve)。收集(ji)细(xi)(xi)胞悬(xuan)(xuan)液(ye)(ye)，4℃1000×g 离(li)心 10min，弃去培(pei)养基，用(yong)(yong)预冷(leng)的(de)(de) PBS 润洗 3 次。加入(ru)(ru)(ru)适(shi)量(liang)(liang)的(de)(de)预冷(leng) PBS 或(huo)(huo)非变(bian)性细(xi)(xi)胞裂(lie)解(jie)(jie)(jie)液(ye)(ye)（临用(yong)(yong)前加入(ru)(ru)(ru)蛋白酶抑制(zhi)剂(ji)(ji)）重(zhong)悬(xuan)(xuan)细(xi)(xi)胞,通(tong)常 6 孔板一(yi)(yi)个孔的(de)(de)细(xi)(xi)胞量(liang)(liang)需(xu)要(yao)(yao) 150-250μL PBS 重(zhong)悬(xuan)(xuan)。 将(jiang)(jiang)(jiang)样品(pin)(pin)放(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)-20℃或(huo)(huo)-80℃，使样品(pin)(pin)冷(leng)冻，再(zai)放(fang)(fang)室(shi)温(wen)解(jie)(jie)(jie)冻样品(pin)(pin)，反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong) 3 次，使细(xi)(xi)胞充(chong)分(fen)裂(lie)解(jie)(jie)(jie),也可(ke)将(jiang)(jiang)(jiang)样品(pin)(pin)进行(xing)超声破碎(sui)，以(yi)达到裂(lie)解(jie)(jie)(jie)的(de)(de)目的(de)(de)。4℃ 10000×g 离(li)心 10min，除去细(xi)(xi)胞碎(sui)片(pian)，取上清(qing)(qing)(qing)(qing)即(ji)可(ke)检测，或(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)(qing)(qing)置(zhi)(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)(dan)应(ying)(ying)避免(mian)(mian)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)。细(xi)(xi)胞培(pei)养物上清(qing)(qing)(qing)(qing)或(huo)(huo)其它生物标本：请1000×g离(li)心20分(fen)钟(zhong)(zhong)，取上清(qing)(qing)(qing)(qing)即(ji)可(ke)检测，或(huo)(huo)将(jiang)(jiang)(jiang)上清(qing)(qing)(qing)(qing)置(zhi)(zhi)于(yu)-20℃或(huo)(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)(dan)应(ying)(ying)避免(mian)(mian)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)。.样本保(bao)存(cun)和稳定(ding)性样本在(zai)(zai) 2-8℃条件(jian)下(xia)，可(ke)以(yi)储(chu)存(cun) 72h，在(zai)(zai)- 20℃或(huo)(huo)-80℃可(ke)以(yi)储(chu)存(cun)6 个月及以(yi)上。样本收集(ji)后(hou)(hou)，不是一(yi)(yi)次检测完，请按(an)一(yi)(yi)次用(yong)(yong)量(liang)(liang)分(fen)装冻存(cun)，避免(mian)(mian)反(fan)(fan)(fan)复冻融(rong)(rong)(rong)(rong)