人猪囊尾蚴抗体(ti)IgG（CYT IgG）酶(mei)联免疫分析

试剂盒使用说明(ming)书

本(ben)试剂盒仅供研究使用。

                                                                       96T

使用目的：

本(ben)试剂盒用(yong)于测定人(ren)血(xue)清、血(xue)浆及相关(guan)液体样(yang)本中囊尾蚴抗(kang)体(ti)IgG（CYT IgG）表达。

实验原理(li)

本试剂(ji)盒应用(yong)双抗原夹(jia)心法测定标本(ben)中猪囊尾蚴抗(kang)体IgG（CYT IgG）表(biao)达(da)。用纯(chun)化的抗(kang)原包被微(wei)孔(kong)板(ban)，制成固相(xiang)抗原，可与样品中猪囊尾(wei)蚴抗体IgG（CYT IgG）相结合，经洗涤(di)除(chu)去未结合的抗(kang)体(ti)和其(qi)他成分后再与(yu)HRP标(biao)记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物(wu)，经过che底洗涤后(hou)加(jia)底物TMB显(xian)色(se)。TMB在HRP酶(mei)(mei)的催(cui)化下转(zhuan)化成蓝色(se)，并在酸(suan)的作用(yong)(yong)下转(zhuan)化成最终的黄色(se)。用(yong)(yong)酶(mei)(mei)标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值(zhi)相比较，从而判定标本中(zhong)猪(zhu)囊尾(wei)蚴抗体IgG（CYT IgG）的(de)存(cun)在与否。

试剂(ji)盒(he)组成

标(biao)本要求(qiu) 

1．标本采集后尽早进(jin)(jin)行(xing)提(ti)取，提(ti)取按相关文献进(jin)(jin)行(xing)，提(ti)取后应尽快进(jin)(jin)行(xing)实验。若不能马上(shang)进(jin)(jin)行(xing)试验，可将标本放于-20℃保(bao)存，但应(ying)避(bi)免反复(fu)冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因(yin)NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作(zuo)步骤(zhou)

1. 编(bian)号(hao)：将样品对(dui)应(ying)(ying)微(wei)孔(kong)按序编(bian)号(hao)，每板应(ying)(ying)设阴性对(dui)照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照(zhao)孔不加(jia)样(yang)品及酶标试(shi)剂，其(qi)余各步操作相同(tong)）

2. 加样：分别在(zai)阴、阳(yang)性(xing)对(dui)照(zhao)孔中加入阴性(xing)对(dui)照(zhao)、阳(yang)性(xing)对(dui)照(zhao)50μl。然(ran)后(hou)在(zai)待测(ce)样(yang)品孔先加(jia)样品稀释液(ye)40μl，然后再加待(dai)测(ce)样品10μl。加(jia)(jia)样将样品加(jia)(jia)于(yu)酶(mei)标板孔(kong)(kong)底部，尽量不触及孔(kong)(kong)壁(bi)，轻轻晃(huang)动混(hun)匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温(wen)育(yu)30分钟(zhong)。   

4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤：小心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜，弃去液体(ti)，甩(shuai)干(gan)，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如(ru)此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试(shi)剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同(tong)3。

8. 洗(xi)涤(di)：操作同5。

9. 显(xian)色：每孔先加入显(xian)色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻(qing)轻(qing)震荡(dang)混匀，37℃避(bi)光显(xian)色10分钟.

10. 终(zhong)止：每孔(kong)加终(zhong)止液50μl，终止反应(ying)（此(ci)时蓝色立(li)转黄色）。

11. 测定：以空白(bai)孔(kong)调(diao)零，450nm波长(zhang)依(yi)序测量(liang)各孔的吸光度（OD值(zhi)）。 测定应在(zai)加终止液后15分(fen)钟以内进行。

注意事项(xiang)

1．操作(zuo)严(yan)格(ge)按照说明书进行(xing)，本(ben)试剂(ji)不同批(pi)号组分不得混(hun)用。

2．试剂盒从冷藏环(huan)境中取出(chu)应在(zai)室(shi)温平衡15-30分钟后方可使(shi)用，酶标包被板(ban)开封(feng)后如未(wei)用完(wan)，板(ban)条应装入密封(feng)袋中保(bao)存。

3．浓洗涤液可(ke)能会有结晶析出(chu)，稀释(shi)时可在水浴中(zhong)加温助(zhu)溶(rong)，洗涤(di)时(shi)不(bu)影响结(jie)果。

4． 封板(ban)膜只限一(yi)次性使用，以避免交叉污(wu)染。

5．底物请(qing)避光保存。

6．试验结果判定必须(xu)以酶(mei)标仪(yi)读数为(wei)准，使用双波长检测时(shi)，参(can)考(kao)波长为(wei)630nm

7．所有样品(pin)，洗涤液(ye)和各(ge)种废弃物(wu)都应按传染物(wu)处理。终止液(ye)为(wei)2M的硫酸，使用(yong)时必须注意安全。