（一(yi)）噬(shi)菌体(ti)的分离(li)和纯(chun)化

1 . 噬菌(jun)体的分离

每份(fen)未处理(li)的污水(shui)样(yang)品取100mL，混合后，经36±1℃培养(yang)14~24h，通(tong)过孔径为0.45mm的薄膜滤器，检查(cha)滤液中是否有噬菌体的存在。用斑点(dian)试验法检查(cha)噬菌体。

 2 . 单斑纯化 

根据斑点试验法的(de)结果，估计滤液(ye)内噬菌体的(de)数量。将滤液(ye)按百倍稀释法作两次连续稀释。即吸(xi)取0.02mL，稀释在(zai)2mL肉(rou)汤(tang)内，使成10-2；再吸(xi)取此稀释液(ye)0.02mL，稀释在(zai)2mL肉(rou)汤(tang)内，使成10-4。

（二）PFU和(he)RTD

PFU和RTD是噬(shi)菌(jun)体效(xiao)价的(de)计(ji)量单(dan)位。PFU是噬(shi)斑形成单(dan)位，表示(shi)有感染能(neng)力的(de)噬(shi)菌(jun)体数(shu)量，以每毫升(sheng)内(nei)的(de)PFU表示(shi)（PFU/ml）。RTD是常规试(shi)验稀释(shi)度，一般以平板上滴加(jia)噬(shi)菌(jun)体的(de)部位刚刚能(neng)够出现(xian)或刚刚不能(neng)出现(xian)完(wan)-全融合性裂解（CL）所需要的(de)噬(shi)菌(jun)体稀释(shi)度。

（三）噬菌体的制备

繁(fan)殖(zhi)菌(jun)：制备(bei)噬菌(jun)体用的宿主菌(jun)称为繁(fan)殖(zhi)菌(jun)，噬菌(jun)体的繁(fan)殖(zhi)菌(jun)应予(yu)以冻(dong)干保存。

噬菌(jun)体种： 制备用的(de)噬菌(jun)体种应经三次纯化后保存，种子(zi)管(guan)先(xian)作PFU测定。

（四）裂解(jie)谱和裂解(jie)模(mo)式

裂(lie)(lie)解谱(pu)是(shi)指一种噬菌体(ti)的作(zuo)用(yong)范围。裂(lie)(lie)解谱(pu)的测(ce)定(ding)是(shi)为了确定(ding)该噬菌体(ti)在种内(nei)或属内(nei)的广谱(pu)性(xing)(xing)，在种外或属外的交(jiao)叉反应性(xing)(xing)。

裂(lie)解模式是指几种(zhong)噬菌(jun)体组成为(wei)配套(tao)，各种(zhong)细菌(jun)培养物被几种(zhong)噬菌(jun)体作(zuo)用而出现的特殊的反应(ying)模式，不同(tong)的细菌(jun)，可呈现不同(tong)的反应(ying)模式。

裂解谱和裂解模式应使(shi)用(yong)(yong)达到规(gui)定效(xiao)价(jia)的噬菌体(ti)进行测定。肠杆菌科诊断用(yong)(yong)噬菌体(ti)一(yi)般用(yong)(yong)原液进行试验，效(xiao)价(jia)要(yao)求在(zai)103~105RTD或109~1011PFU/ml之间(jian)。分型(xing)试验一(yi)般用(yong)(yong)1 RTD的噬菌体(ti)。

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