检(jian)测范(fan)围：

5U/L -180U/L

使用目(mu)的：

本试剂(ji)盒用于测定植物(wu)组织，细胞及其它相关(guan)样本中羟基肉桂酰基转移(yi)酶(mei)（HCT） 活(huo)性。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测(ce)(ce)定(ding)标(biao)本中植物(wu)羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT）水平。用纯化(hua)的植物(wu)羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT）抗体包被微孔(kong)板(ban)，制成(cheng)固相抗体，往包被单抗的微孔(kong)中依次加入(ru)植物(wu)羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT），再与HRP标(biao)记的羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT）抗体结合(he)，形成(cheng)抗体-抗原(yuan)-酶标(biao)抗体复合(he)物(wu)，经(jing)过彻che底洗涤后加底物(wu)TMB显色(se)。TMB在HRP酶的催化(hua)下转(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)成(cheng)蓝色(se)，并在酸的作用下转(zhuan)(zhuan)(zhuan)化(hua)成(cheng)最(zui)终的黄色(se)。颜色(se)的深浅和样品中的植物(wu)羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT）呈正(zheng)相关。用酶标(biao)仪(yi)在450nm波长(zhang)下测(ce)(ce)定(ding)吸光度（OD值），通过标(biao)准曲线计(ji)算样品中植物(wu)羟基(ji)肉桂酰基(ji)转(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)(yi)(yi)酶（HCT） 活性(xing)浓度。 

标(biao)本要(yao)求 

1．标(biao)本采集后尽(jin)早进(jin)行(xing)提取，提取按相关文(wen)献(xian)进(jin)行(xing)，提取后应(ying)尽(jin)快进(jin)行(xing)实(shi)验(yan)。若不能马(ma)上(shang)进(jin)行(xing)试(shi)验(yan)，可将标(biao)本放于-20℃保存，但应(ying)避免反(fan)复冻(dong)融

2．不能检(jian)测含NaN3的(de)样(yang)品(pin)，因NaN3抑制辣(la)根(gen)过氧(yang)化物酶(mei)的(de)（HRP）活性。

操作步骤

1.标(biao)准(zhun)品的稀(xi)释(shi)：本试剂(ji)盒提供原倍标(biao)准(zhun)品一支(zhi)，用户可(ke)按照下列(lie)图表在小试管中(zhong)进行稀(xi)释(shi)。

160U/L5号(hao)标(biao)准(zhun)(zhun)品(pin)150μl的(de)原倍标(biao)准(zhun)(zhun)品(pin)加入150μl标(biao)准(zhun)(zhun)品(pin)稀释(shi)液

80 U/L4号标准(zhun)(zhun)品(pin)150μl的5号标准(zhun)(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)150μl标准(zhun)(zhun)品(pin)稀释液

40 U/L3号标准(zhun)品(pin)(pin)150μl的(de)4号标准(zhun)品(pin)(pin)加入150μl标准(zhun)品(pin)(pin)稀释液

20U/L2号标(biao)准品(pin)150μl的3号标(biao)准品(pin)加入150μl标(biao)准品(pin)稀释液

10U/L1号标(biao)准品150μl的(de)2号标(biao)准品加入150μl标(biao)准品稀释液(ye)

2.加(jia)(jia)(jia)样(yang)(yang)(yang)(yang)：分别设空白(bai)孔(kong)（空白(bai)对照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)(jia)(jia)样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及酶(mei)标试(shi)剂，其余各步操作相同）、标准孔(kong)、待测样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)标包被板上标准品(pin)准确加(jia)(jia)(jia)样(yang)(yang)(yang)(yang)50μl，待测样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔(kong)中先加(jia)(jia)(jia)样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀释(shi)液40μl，然后(hou)再(zai)加(jia)(jia)(jia)待测样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)最终稀释(shi)度为5倍(bei)）。加(jia)(jia)(jia)样(yang)(yang)(yang)(yang)将样(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加(jia)(jia)(jia)于酶(mei)标板孔(kong)底(di)部，尽量不(bu)触及孔(kong)壁，轻轻晃动混匀。

3.温(wen)育：用(yong)封板膜封板后置37℃温(wen)育30分(fen)钟。   

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用(yong)蒸馏水(shui)30倍稀释后备用(yong)

5.洗(xi)涤：小心揭掉(diao)封板(ban)膜，弃(qi)去(qu)液(ye)体，甩干，每孔(kong)加(jia)满洗(xi)涤液(ye)，静(jing)置30秒后(hou)弃(qi)去(qu)，如此重复5次，拍干。

6.加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶标试剂(ji)50μl，空白孔(kong)除外。 

7.温育：操(cao)作同3。

8.洗涤(di)：操作同(tong)5。

9.显色：每(mei)孔先加(jia)入(ru)显色剂(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)显色剂(ji)B50μl，轻轻震(zhen)荡混匀，37℃避光显色10分(fen)钟.

10.终(zhong)止：每孔加终(zhong)止液(ye)50μl，终(zhong)止反应（此时蓝色立(li)转黄(huang)色）。

11.测定：以(yi)空白孔调(diao)零，450nm波长依(yi)序测量各孔的吸光(guang)度（OD值）。 测定应在加(jia)终止(zhi)液后15分(fen)钟(zhong)以(yi)内进行。

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